elisa酶聯(lián)免疫試劑盒科普

　　一、簡介
 

　　elisa酶聯(lián)免疫試劑盒是酶免疫測定技術(shù)中應(yīng)用很廣的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使酶標記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。
 

　　二、成分
 

　　試劑盒內(nèi)包括以下試劑：
 

　　1.酶標板(96孔板)
 

　　2.血清檢測抗體試劑(固定在小板上)
 

　　3.特異性標記兔抗人IgG辣根過氧化物酶(HRP)
 

　　4.HRP底物染色液
 

　　5.固定酶標板的NaCI-Pi緩沖液
 

　　6.去污液
 

　　7.色譜純洗板緩沖液
 

　　三、樣本類型
 

　　本試劑盒可檢測不同種類的生物樣本，包括：血清、血漿、組織抽提物、陽性參考樣本、陰性對照樣本等。不過首先要保證樣本與試劑之間無相互干擾。
 

　　四、儲藏
 

　　應(yīng)于2-8℃的陰涼干燥處存放。如需長期貯存，應(yīng)冷凍保存(-20℃或-80℃)。
 

　　五、試劑準備
 

　　1.酶標板制備：首先，在每個空白小孔板的每個孔中，添加50μL的PBS(0.01M)。然后將板放入一個旋轉(zhuǎn)式混合器中，溫和混合，管孔覆蓋在對應(yīng)的坑孔區(qū)域上，將坑孔以180度反轉(zhuǎn)，然后在抽走液體后，再次將坑孔埋入緩沖液中，丟棄PBS。最后，將板于坑孔中添加100µl的固定抗體，每個備件(坑孔)盡可能多添加固定抗體。
 

　　2.樣品制備：將樣品與樣品稀釋液按照比例混合。
 

　　3.銷量質(zhì)控制備：將陽性參考樣本與陰性對照樣本準備好。
 

　　六、操作步驟
 

　　1.將酶標板每個小孔內(nèi)填充50µL固定酶標記性抗體時，將板制備至2-8℃下存儲20小時。
 

　　2.將液態(tài)樣品溶于樣品稀釋液中，使樣品達到適合檢測的濃度。樣品應(yīng)避免過度稀釋或過度濃縮。
 

　　3.然后，向每個小孔中加入50µl的稀釋后的樣品，以及50µl的陽性參考樣本、50µl的陰性對照樣本。
 

　　4.使用封板膜密封，并在37℃恒溫箱中孵化60分鐘。
 

　　5.丟棄所有的液體，并在試劑盒內(nèi)水龍頭下沖洗各個小孔以清除未被綁定的物質(zhì)。
 

　　6.將200υl洗板緩沖液加入每個小孔中，用廢液槽放置一段時間后，倒掉，重復(fù)此操作至少3次。
 

　　7.向每個小孔中加入50µl的HRP標記羊抗人IgG，孵化37℃下30分鐘。
 

　　8.重復(fù)步驟6以清除未結(jié)合的物質(zhì)。
 

　　9.將50µl的HRP底物添加到每個小孔，并在黑暗中置于室溫靜止15分鐘。
 

　　10.停止反應(yīng)，加入50µl停止液應(yīng)用于每個孔中。
 

　　11.讀取OD值測量各小孔校準曲線，計算樣本的質(zhì)量濃度。
 

　　七、注意事項
 

　　1.在開封后要存放于適當?shù)谋４鏃l件下。
 

　　2.操作前檢查所有步驟的操作方法和準備工作。
 

　　3.下一步操作前，須確保上一步的操作完成，并按照試劑盒內(nèi)的實驗步驟進行。
 

　　4.空白對照、陽性對照和含待測物品的樣品需分別分管的水龍頭下漂洗小孔。
 

　　5.如需要測量微量的樣品，需使用微量孔板。
 

　　八、禁忌事項
 

　　1、本檢測盒內(nèi)禁止使用過期試劑。
 

　　2、禁止本試劑盒內(nèi)的試劑與其他試劑或活性物質(zhì)混合使用。
 

　　3、禁止口服或其他接觸本試劑盒內(nèi)的試劑。如發(fā)生皮膚敏感現(xiàn)象或可能影響人體內(nèi)部健康，應(yīng)進行醫(yī)學干預(yù)。
 

　　九、適用范圍
 

　　本檢驗盒被廣泛運用于檢測各類疾病，如傳染病、自身免疫性疾病，腫瘤標志物、突變基因等。
 

　　十、質(zhì)控
 

　　在正常操作中，該檢測盒可保證準確性和可重復(fù)性。如果使用中發(fā)現(xiàn)問題，請先嘗試實驗操作流程，如仍然無法解決，可向生產(chǎn)廠家進行垂詢。
 

　　以上就是對Elisa酶聯(lián)免疫試劑盒的說明書，希望各位用戶在使用本試劑盒時一定要加倍謹慎，按照說明書操作，以確保檢測結(jié)果準確無誤。