質粒菌株產品操作說明

一、擴增流程
收到產品后，請先根據產品管壁標簽來判斷產品形式，并在擴增前準確查找該質粒菌株的抗性、感受態和培養溫度。
1、質粒干粉（常溫運輸，存于-20度，90天保質期，請務必轉化挑單克隆培養，不要直接使用和測序）
①收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min，再加入20μl ddH2O去離子水溶解質粒；
②取1支100μl 感受態于冰上解凍10min，加入2μl質粒，再冰浴30min后，42℃熱激60s，不要攪動，再冰浴2min；（從第二步開始均要在超凈工作臺中無菌操作）
③加入900μl無抗的LB液體培養基，180rpm震蕩37℃培養45min；
④6000rpm離心5min，僅留100μl上清液重懸細菌沉淀，并涂布至目標質粒抗性的LB平板上；（可使用本平臺的平板涂布專用玻璃珠進行涂布，可以比傳統涂布方法獲得更多轉化子）
⑤將平板正向培養1h，再倒置37℃培養14h。如果要求是30度則培養20h；
（菌落過多則將質粒稀釋后再轉化。沒有菌落則加入10μl質粒轉化。另不要直接轉表達感受態，要先轉克隆感受態，重提質粒后再導入表達感受態）
⑥挑取單菌落至LB液體培養基中，加入對應抗生素，220rpm震蕩培養14h，根據實驗需要和質粒提取試劑盒說明書提取質粒。
2、甘油菌種（冰袋運輸，存于-80℃，保質期90天，請務必劃線挑單克隆培養）
四區劃線后挑單菌落培養，酵母菌需要先液體復蘇再四區劃線，再挑單菌落液體培養。
3、穿刺菌種（冰袋運輸，存于4℃，保質期7天）
穿刺接種，液體培養后四區劃線，再挑單菌落液體培養。
4、菌落平板（冰袋運輸，存于4℃，保質期7天）
直接挑取單菌落至液體培養基中。
5、液體質粒（冰袋運輸，存于-20℃，保質期90天）
單獨提取的液體質粒收到后可直接使用。
6、濾紙質粒（常溫運輸，存于-20度，90天保質期，請務必轉化挑單克隆培養，不要直接使用和測序）
收到貨后將濾紙畫圈部分剪下放入EP管中，加100ul無菌水將濾紙浸濕并浸泡5min，吸取5ul質粒轉化，離心全涂。


二、轉化圖片