酶聯免疫吸附試驗方法

酶聯免疫吸附試驗方法：

1、間接法（indirect elisa）

a.將已知抗原吸附于固相載體，酶標記二抗。

b.檢測液相中未知抗原。

2、雙抗體夾心法（sandwich elisa）

a.將已知抗體吸附于固相載體，酶標記一抗。

b.檢測液相中可溶性抗原。

3、競爭法（competitive elisa）

a.將已知抗體或抗原吸附于固相載體，酶標記抗體或抗原。

b.檢測液相中可溶性抗原或抗體。

酶標記抗體工作濃度的選擇：先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。當前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。