關于微生物菌種的冷凍干燥保藏轉接技術

建議用下列方法恢復培養冷凍干燥保藏的菌種。

1、安瓶管開封

用浸過70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。

用火焰將安瓿管頂端加熱。

滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。

用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。

2、菌株恢復培養

用無菌吸管，吸取0.3-0.5ml適宜的液體培養基，滴人安瓿管內，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。

取0.1-0.2ml菌體懸浮液，移植于適宜的瓊脂斜面/平板培養基上，剩余的菌液，注入適宜的液體培養基內，然后在建議的溫度下培養。

3、注意事項

菌種活化前，請將安瓿管保存在6一10℃的環境下。

厭氧菌的培養，如無特別說明，自開封至接種完成，均需以無氧氣體充填，以保持厭氧狀態。

某些菌種經過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需連續兩次繼代培養才能正常生長，此時請將步驟二重復一次。

轉接方法：

真菌轉接需使用的接種工具為接種鉤、鏟，其樣式大小。制造的金屬可用鉑絲或鎳絲，也可使用電爐絲，原則是軟硬度適當，能經受反復火焰燒紅。接種真菌的接種鉤、鏟，其絲的直徑以1毫米比較適合。步驟：右手執針（鏟、鉤等），左手執管，燒針滅菌，拔塞燒口，挑菌移植，燒口塞管，燒針滅菌等。

右手執接種鉤、鏟，使前端細絲的部位全部在火焰上燒紅殺菌，左手執斜面試管，試管口在拔塞前快速通過火焰，不要使試管口過熱；

接種鉤、鏟前端細絲的部位全部燒紅后插入70%無菌酒精里，拿出再燒紅，空氣中自然冷卻或放入70%無菌酒精瓶內冷卻，再將接種鉤、鏟前端細絲的部位快速通過火焰除去酒精；

用接種接種鉤、鏟挑取菌塊移植到新的斜面培養基上（斜面試管管口滅菌）后；

試管口和塞子快速通過火焰滅菌，不要使試管口過熱或使棉塞著火；

斜面試管口塞緊硅膠塞或棉塞，將接種鉤、鏟接觸真菌的部位燒紅后放入70%無菌酒精瓶中；

接種后的試管放25℃（無特殊溫度要求的真菌）培養箱培養。