豬藍耳病毒PCR檢測的前處理步驟有哪些

【實驗原理】

應用雙抗原夾心法測定標本中指標表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中指標相結合，經過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）與待測樣品中豬藍耳病毒(PRRS)濃度呈正相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中豬藍耳病毒(PRRS)的濃度。

豬藍耳病毒（PRRSV）PCR檢測的前處理步驟主要包括樣本采集、保存及核酸提取：

樣本采集‌：

‌組織樣本‌：優先采集肺臟、扁桃體、淋巴結等含毒量高的組織，活體剖檢時需無菌操作，每份組織單獨封裝‌。

‌血液/血清‌：前腔靜脈采血3-5ml，凝固后2-8℃冷藏（≤3天）或-20℃冷凍（≤30天），避免溶血‌。

‌其他樣本‌：如口腔液、閹割睪丸液、死胎舌頭等，需注意避免環境污染。

樣本保存與運輸‌：

‌短期保存‌：2-8℃冷藏（≤72小時），長期需-70℃冷凍，避免反復凍融（≤3次）‌。

‌運輸條件‌：加冰密封，維持低溫狀態。

核酸提取‌：

‌組織處理‌：稱取2g組織加入PBS研磨，反復凍融3次裂解細胞。

‌裂解與純化‌：使用TRIzol法提取RNA，加入氯仿-異戊醇抽提，異丙醇沉淀后75%乙醇洗滌，DEPC水溶解‌。