西尼羅病毒（WN）IgG抗體ELISA檢測試劑盒利用了西尼羅重組抗原檢測人體血清或血漿中的西尼羅抗體。本實驗僅用于輔助診斷人感染了西尼羅病毒，不用于篩查血液或血液成分。僅供專業人員體外診斷使用。感染了西尼羅病毒會導致包括腦炎等一系列癥狀的疾病，西尼羅病毒在世界廣泛傳播，已在50多個國家檢測出該病毒。本試驗經CDC提供的試劑檢驗與驗證。

產品介紹

西尼羅病毒（WN）IgG抗體ELISA檢測試劑盒

僅供科研使用

用途

西尼羅(WN)病毒IgG ELISA，利用了西尼羅重組抗原檢測人體血清或血漿中的西尼羅抗體。本實驗僅用于輔助診斷人感染了西尼羅病毒，不用于篩查血液或血液成分。僅供專業人員體外診斷使用。

概述

 感染了西尼羅病毒會導致包括腦炎等一系列癥狀的疾病，西尼羅病毒在世界廣泛傳播，已在50多個國家檢測出該病毒。本試驗經CDC提供的試劑檢驗與驗證。本試驗使用了一種稱為WNRA的重組抗原，它可以作為西尼羅病毒感染的快速血清學指標，WNRA蛋白是一種重組抗原，它是由含有西尼羅病毒兩個抗原的序列多肽構成。

實驗的原理

檢測西尼羅病毒IgG ELISA 是基于兩步夾心法原理制造的。

提供的材料

1.        微孔板（96孔 12x8）：即用  每孔均包被結合西尼羅重組抗原的單抗。2－8℃下保存至保質期。

注意：WNRA和NCA已包被于微孔板。

2.        IgG樣品稀釋液：1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。

3.        IgG陰性質控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。

4.        IgG陽性質控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。

5.        洗滌液（10X）：1瓶 120ml  2－8℃下保存至使用。

6.        EnWash：1瓶 20ml 2－8℃下保存至使用。

7.        酶聯物：一瓶6ml 即用 2－8℃下保存至使用。

8.        TMB底物液： 1支 9ml 即用  2－8℃下保存至使用。

9.        終止液；1支6ml 即用  2－8℃下保存至使用。

試劑應避免反復凍融。

操作步驟

在使用前將所有試劑和樣品平衡至室溫，并輕輕倒轉使其充分混勻。

實驗準備：

將10X的濃縮洗滌液稀釋,將120ml的濃縮洗滌液加上1080ml的蒸餾水，搖勻，至無任何沉淀，稀釋好的洗滌液多可在室溫下放置兩個星期。

準備實驗所需的板條，剩余的板條應盡快放入袋子里重新密封，在2－8℃下儲存至保質期。

操作步驟：

1.     標記將要使用的板條，注意微孔板已經按照統一排列，如下所述包被西尼羅抗原和質控抗原。

2.     將血清樣品﹑陰性質控和陽性質控同樣地用樣品稀釋液按1：300稀釋。

3.       每孔加入50ul稀釋后的樣品，以下為一個血清樣品使用一個板條的*。

4.       封板，在濕潤的溫育器里37℃下溫育1小時。

5.       溫育后，用自動洗板機，使用洗滌液洗板6次。

6.       在每孔中加入50ul的酶聯物。

7.       封板，在濕潤的溫育器里37℃下溫育1小時。

8.       溫育后，用自動洗板機，使用洗滌液洗板6次。

9.       每孔加入150ul的EnWash，在室溫下溫育5分鐘

10.   溫育后，用自動洗板機，使用洗滌液洗板6次。

11.   每孔加入75ul的TMB底物液。

12.   封板，在室溫下，避光處溫育10分鐘。

13.   每孔加入50ul的終止液終止反應。

14.   在450nm處讀取吸光率。

結果的計算

結果的變化將會非常大，以下結果僅供指引。

計算ISR值：

計算在同一實驗里WNR抗原的兩個陰性質控的平均值，計算同一實驗里NC抗原的兩個陰性質控的平均值，用WNRA/NCA，得出陰性質控的ISR值。同樣地計算陽性質控和樣品得ISR值，陽性質控的ISR值應高于3.0，陰性質控的ISR值應低于1.5。

結果的判斷：

在某些特殊的例子中，曾報道有假陽性，但對梅毒病人無限制。假如樣品的ISR值大于2.0，但是WNRA和NCA的OD值均偏低，可視為潛在假陽性。以下為樣品1排除標準的范例。

排除標準：

計算陰性質控的WNRA和NCA值：

平均WNRA=0.260/2=0.130

     NCA=0.236/2=0.118

     ISR=0.130/0.118=1.10

任何陰性質控的ISR值高于1.5，則實驗需要重做。

計算陽性質控的WNRA和NCA值：

平均WNRA=1.290/2=0.645

     NCA=0.368/2=0.184

     ISR=0.645/0.184=3.5

任何陽性質控的ISR值低于3.0，則實驗需要重做。

以下標準是必需遵守的，不滿足以下標準，試劑出現了質量問題或操作錯誤，實驗需重做。

解釋結果

1.  樣品的ISR值大于3.0視為陽性。

2.  陽性結果需重做證明。

3.  樣品的ISR值小于2.0視為陰性。

4.  樣品的ISR值小于3.0但是大于2.0，視為未確定，但是很有可能陽性，實驗需一式三份重做。

5.  ISR值大于2.0是因為WNRA和NCA的值都低造成的，應該視為潛在假陽性。

樣品1低OD值的范例：
計算樣品的WNRA和NCA值：

平均WNRA=0.060/2=0.030

     NCA=0.026/2=0.013

     ISR=0.030/0.013=2.31

雖然樣品的ISR值高于2.0，但是本樣品需視為假陽性，因為其OD值低，而且遠遠偏離了相關的標準品，這通常在空白值高的情況下發生。

要進一步證實樣品，所有陽性的結果都要用6，2層析稀釋滴定法重做，與相同滴定法的陰性質控相比較，假如曲線是？？的，平的或者是波浪型的曲線，則表明為假陽性的結果。

實驗的局限性

1.  樣品的OD值高于抗原質控（非WNRA）,導致ISR值小于3.0，則可能為假陰性，再釋稀樣品重新實驗，可能會獲得真正的ISR值。

2.  既然這不是一個直接檢測的方法，則需考慮假陽性和假陰性存在的可能性。

3.  所有有反應的樣品，應用確定性實驗來證實。

4.  本實驗提供的試劑，盡可能地檢測血清或血漿中的WNRA反應性抗體水平。

5.  應避免反復凍融樣品和試劑。

6.  不要使用溶血或脂血的樣品，它們會導致錯誤的結果。

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準

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